Coa expansión da escala de cultivo e o aumento da densidade de cultivo, a enfermidade de Apostichopus japonicus gañou en importancia, o que provocou graves perdas para a industria da acuicultura. As enfermidades de Apostichopus japonicus están causadas principalmente por bacterias, virus e ciliados, entre os cales a síndrome da podremia da pel causada por Vibrio brilliant é a máis grave. Co agravamento da enfermidade, a parede corporal de Apostichopus japonicus úlcerase, formando manchas azuis e brancas, e finalmente autodisólvese ata a morte, disolvéndose no moco nasal como un coloide. Na prevención e tratamento tradicional de enfermidades, os antibióticos úsanse amplamente. Pero o uso a longo prazo de antibióticos non só ten o perigo oculto da resistencia bacteriana e dos residuos de fármacos, senón que tamén trae consigo a seguridade alimentaria e a contaminación ambiental. Polo tanto, o desenvolvemento dunha preparación non contaminante, sen residuos e segura para reducir a enfermidade do pepino de mar é un dos puntos candentes da investigación actual.

O diformiato de potasio é un po solto cristalino branco, seco e insípido. É o primeiro aditivo para pensos non antibiótico aprobado pola Unión Europea para substituír os antibióticos. Pode promover o crecemento de animais de cultivo, inhibir o crecemento de bacterias nocivas e mellorar o ambiente intestinal. O diformiato de potasio pode mellorar significativamente o crecemento e o rendemento dos organismos acuáticos.

1 Resultados da proba

1.1 Efectos do diformiato de potasio da dieta no crecemento e a supervivencia do pepino de mar *Apostichopus japonicus*

A taxa de crecemento específica de Apostichopus japonicus aumentou significativamente co aumento do contido de diformiato de potasio na dieta. Cando o contido de diformiato de potasio na dieta alcanzou o 0,8 %, é dicir, cando o contido de diformiato de potasio na dieta foi do 1,0 % e do 1,2 %, a taxa de crecemento específica de Apostichopus japonicus foi significativamente maior que a doutros tratamentos. Mais non houbo diferenzas significativas (P > 0,05) (táboa 2-2). A taxa de supervivencia do pepino de mar foi do 100 % en todos os grupos.

1.2 Efectos do diformiato de potasio da dieta sobre os índices inmunitarios do pepino de mar Apostichopus japonicus

En comparación co grupo de control, diferentes niveis de dicarboxilato de potasio poderían mellorar a capacidade fagocítica dos celomocitos e a produción de O2, en diferentes graos (táboa 2-3). Cando se engadiu diformiato de potasio ao 1,0 % e ao 1,2 %, a actividade fagocítica dos celomocitos e a produción de especies reactivas de osíxeno O2 nas holoturias foron significativamente maiores que nas do grupo de control, pero non houbo diferenzas significativas entre os grupos con diformiato de potasio ao 1 % e ao 1,2 %, nin entre outros niveis de diformiato de potasio e o grupo de control. Co aumento do contido de dicarboxilato de potasio no alimento, a SOD e a NOS das holoturias aumentaron.

1.3 Efecto do diformiato de potasio da dieta na resistencia do pepino de mar á infección por Vibrio brilliant

1,4 días despois da exposición, a mortalidade acumulada das holoturias no grupo de control foi do 46,67 %, significativamente maior que a dos grupos con diformiato de potasio ao 0,4 %, 0,6 %, 0,8 %, 1,0 % e 1,2 % (26,67 %, 26,67 %, 30 %, 30 % e 23,33 %), pero non houbo diferenzas significativas co grupo de tratamento ao 0,2 % (38,33 %). A mortalidade das holoturias nos grupos con diformiato de potasio ao 0,4 %, 0,6 %, 0,8 %, 1,0 % e 1,2 % non observou diferenzas significativas.

2. Debate

2.1 Efecto do dicarboxilato de potasio no crecemento do pepino de mar Apostichopus japonicus

Nos animais, o mecanismo de acción do dicarboxilato de potasio é principalmente entrar no tracto gastrointestinal, mellorar o ambiente gastrointestinal, regular o pH e eliminar bacterias nocivas (Ramli e sunanto, 2005). Ademais, o diformiato de potasio tamén pode promover a absorción de nutrientes nos alimentos e mellorar a dixestibilidade e a taxa de utilización dos animais de cultivo. Na aplicación en animais acuáticos, os experimentos demostraron que o diformiato de potasio pode mellorar significativamente o crecemento e a taxa de supervivencia dos camaróns (he Suxu, Zhou Zhigang, et al., 2006). Neste estudo, o crecemento do pepino de mar (Apostichopus japonicus) promoveuse engadindo dicarboxilato de potasio aos alimentos, o que foi consistente cos resultados da aplicación de dicarboxilato de potasio en leitóns e porcos de engorde informados por verland. M (2000).

2.2 Efecto do dicarboxilato de potasio na inmunidade do pepino de mar Apostichopus japonicus

O *Apostichopus japonicus* ten o mesmo mecanismo de defensa que outros equinodermos, que se completa mediante unha resposta inmunitaria celular e non celular (humoral). Úsase principalmente para identificar e eliminar corpos estraños que entran no corpo do animal, ou para convertelos en substancias inofensivas, e para reparar feridas. A resposta inmunitaria celular dos equinodermos complétase mediante unha variedade de celomocitos, que forman o sistema de defensa dos equinodermos. As principais funcións destas células inclúen a fagocitose, a reacción ás citotoxinas e a produción de substancias antibacterianas a nivel de coagulación (kudriavtsev, 2000). No proceso de fagocitose, os celomocitos poden ser inducidos por bacterias ou compoñentes da parede celular bacteriana para producir especies reactivas de osíxeno (ROS), incluíndo no, H2O2, OH e O2-. Neste experimento, engadir 1,0 % e 1,2 % de dicarboxilato de potasio á dieta aumentou significativamente a actividade fagocítica dos celomocitos e a produción de especies reactivas de osíxeno. Non obstante, é necesario estudar máis o mecanismo polo que o diformiato de potasio aumenta a actividade fagocítica e a produción de O2.

2.3 Efecto do dicarboxilato de potasio na flora intestinal do pepino de mar *Apostichopus japonicus*

O dicarboxilato de potasio pode descompoñerse en ácido fórmico e formiato nun ambiente alcalino débil e entrar nas células microbianas a través da membrana celular. Pode cambiar o ambiente de vida de microorganismos nocivos como Escherichia coli e Salmonella ao cambiar o valor do pH dentro das células e impedir a súa reprodución, para regular o equilibrio microecolóxico intestinal (eidelsburger, 1998). O efecto do dicarboxilato de potasio na microflora intestinal: macroscopicamente, os H+ producidos pola descomposición do dicarboxilato de potasio reducen o valor do pH no intestino e inhiben o crecemento da microflora intestinal. Microscopicamente, os H+ entran nas células bacterianas a través da membrana celular, destrúen directamente a actividade dos encimas intracelulares, afectan o metabolismo das proteínas microbianas e o ácido nucleico e desempeñan un papel na esterilización (Roth, 1998). Os resultados mostraron que o diformiato de potasio tiña pouco efecto sobre o total de bacterias intestinais do pepino de mar, pero podía inhibir significativamente o número de Vibrio.

2.4 Efecto do dicarboxilato de potasio na resistencia ás enfermidades do pepino de mar *Apostichopus japonicus*

Vibrio splendens é a bacteria patóxena da síndrome da podremia da pel do pepino de mar, que é prexudicial para a produción e o cultivo desta especie. Este experimento demostrou que engadir dicarboxilato de potasio ao alimento reduciu a mortalidade do pepino de mar infectado con Vibrio brilliant. Isto pode estar relacionado co efecto inhibitorio do diformiato de potasio sobre o Vibrio.

3 Conclusión

Os resultados mostraron que o diformiato de potasio da dieta tivo un efecto significativo no crecemento de *Apostichopus japonicus*, tivo un efecto positivo na inmunidade non específica de *Apostichopus japonicus* e mellorou a inmunidade humoral e celular de *Apostichopus japonicus*. A adición de dicarboxilato de potasio á dieta reduciu significativamente o número de bacterias nocivas nos intestinos das holoturias e mellorou a resistencia ás enfermidades das holoturias infectadas con *Vibrio brilliant*. En conclusión, o dicarboxilato de potasio pódese usar como potenciador inmunitario na alimentación das holoturias, e a dose axeitada de dicarboxilato de potasio é do 1,0 %.